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                    凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) 分子生物試劑

                    • 更新時間:  2023-07-27
                    • 產品型號:  12362
                    • 簡單描述
                    • 凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
                      純化得到至多10 mg的無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA


                      純化得到的DNA內毒素水平低于0.1 EU/µg


                      純化流程快,同時去除內毒素



                      獲得高產量、高拷貝質粒DNA



                      使用LyseBlue,獲得的裂解和高產量的DNA
                    詳細介紹

                    凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

                    純化得到至多500 μg無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA

                    • 純化得到的DNA內毒素低于0.1 EU/µg

                    • 純化流程快,同時去除內毒素

                    • 獲得高產量的高拷貝質粒DNA

                    • 使用LyseBlue,獲得的裂解和高產量的DNA

                    EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術,可快速制備不含內毒素的質粒DNA。QIAfilter Cartridges通過過濾快速澄清裂解液,DNA產量至多500 μg(Maxi)、2.5 mg(Mega)和10 mg(Giga)。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度,非常適合超轉染級純的應用。

                    質粒純化方法與轉染效率。

                    使用兩種方法獨立制備pRSVcat,分別使用脂質體介導的方法轉染到COS-7、HeLa和LMH細胞中,及使用磷酸鈣轉染至Huh7細胞中。平均轉染效率以相對于QIAGEN Plasmid Kit制備的DNA的轉染效率表示。

                    凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

                    性能

                    EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內毒素去除步驟整合到質粒純化過程中,不需要額外步驟,也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Maxi Cartridge過濾細菌裂解液,通過重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質粒DNA。100–250 ml培養(yǎng)菌液至多可純化500 µg DNA。(培養(yǎng)量取決于質粒拷貝數量、插入片段大小、宿主菌和培養(yǎng)介質。)純化的DNA無內毒素(<0.1 EU/µg DNA)。

                    EndoFree Plasmid Kits去除細菌在裂解過程中釋放的內毒素,內毒素會影響原代細胞和敏感培養(yǎng)細胞的DNA轉染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內毒素DNA高度適用于可重復且結果可靠的轉染。QIAGEN超純無內毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應用。

                    質粒制備中的內毒素水平*
                    質粒準備方法內毒素(EU?/µg DNA)平均轉染效率?
                    EndoFree Plasmid Kit0.1154%
                    QIAGEN Plasmid Kit9.3100
                    2x CsCl2.699%
                    Silica-gel slurry1230.024%
                    * 宿主菌:大腸桿菌DH5α  質粒:pRSVcat.
                    ? 1 ng LPS = 1.8 EU.
                    ? 根據表中數據計算 "Plasmid purification method versus transfection efficiency".
                    無內毒素DNA配合原代細胞得到高轉染率*
                    DNA純化方法轉染細胞百分比
                    EndoFree Plasmid Kit21.0% ± 0.93
                    QIAGEN Plasmid Kit8.1% ± 0.57
                    Silica-gel slurry5.2% ± 0.74
                    * 原代兔胃壁細胞轉染pEGFP-N2(CLONTECH),pEGFP-N2由所示的方法制備。使用Effectene Transfection Reagent進行轉染。該數據是細胞表達GFP的百分率,由轉染48小時后綠色熒光細胞數量確定。轉染效率是每種純化方法制備的超過2個不同的DNA中6–9個復制樣本的平均值。(數據由C. Chew and J. Parente友情提供, Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.)
                    原理

                    純化的質粒DNA內毒素污染水平取決于所用的純化方法。硅膠技術純化的DNA具有非常高的內毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內毒素去除步驟,獲得<0.1 EU/µg的質粒DNA。





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